Pureza por HPLC en péptidos: cómo interpretar el porcentaje del COA

Qué mide la cromatografía HPLC

La cromatografía líquida de alta resolución separa los componentes de una muestra según su afinidad por una fase estacionaria. Cada componente aparece como un pico en el cromatograma y el área bajo ese pico se traduce en un porcentaje del total detectado.

Cuando un certificado indica una pureza del 99,2 %, significa que el pico correspondiente al péptido declarado representa esa fracción del área total detectada bajo las condiciones del ensayo.

Qué no mide el porcentaje de pureza

• No confirma por sí solo la identidad del compuesto: eso lo hace la espectrometría de masas.
• No informa sobre contenido de agua, sales residuales ni contraiones.
• No cuantifica endotoxinas ni carga microbiana.
• No garantiza la estabilidad futura del material tras el almacenamiento.

Cómo leer el cromatograma

Un cromatograma limpio muestra un pico principal alto y estrecho, con una línea base estable. Los picos secundarios pequeños suelen corresponder a impurezas de síntesis o a fragmentos de la secuencia.

Conviene revisar el tiempo de retención del pico principal, la resolución respecto de los picos vecinos y las condiciones declaradas del método: columna, gradiente y longitud de onda de detección.

Señales de un informe poco fiable

• Cromatograma sin ejes, sin escala o sin condiciones del método.
• Ausencia de número de lote o de fecha de ensayo.
• Mismo informe reutilizado para varias referencias distintas.
• Pureza declarada sin ningún cromatograma adjunto.
• Falta de resultados de espectrometría de masas.

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